人糖皮质激素受体β与绿色荧光蛋白融合基因共表达慢病毒载体的构建

摘要：

目的:构建人糖皮质激素受体(GR)β与绿色荧光蛋白(GFP)共表达的慢病毒载体.方法:采用基因重组技术从人胚脑表达文库内获得人GRβ cDNA,双酶切法将目的片段克隆人pGC-LV载体中,获得重组载体pGC-FU-GRβ.测序正确的质粒pGC-FU-GRβ通过脂质体Lipofectamine 2000转染293T细胞.通过荧光检测和Western Blot检测鉴定慢病毒表达载体质粒.与辅助包装质粒转染293T细胞,包装后产生病毒液,Real-time PCR法测定其滴度.结果:成功构建人GRβ-GFP重组慢病毒表达载体,转染293T细胞后,荧光显微镜下可见大量绿色荧光,Western Blot检测到GRβ-GFP融合蛋白的表达.Real-time PCR测定病毒滴度为2.00E+8 TU/ml.结论:成功构建了人GRβ与GFP基因共表达的慢病毒表达载体,为探讨以激素为首选药物的慢性鼻-鼻窦炎等疾病治疗中GRβ与激素治疗敏感及抵抗的关系,提供了稳定的感染细胞载体.

关键词：糖皮质激素受体β、绿色荧光蛋白、慢病毒载体、转染

所属期刊栏目：26

分类号：R34(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：国家自然科学基金;山东省优秀中青年科学家科研奖励基金

在线出版日期：2012-12-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：792-795