神经红蛋白的表达、分离纯化和谱学表征

摘要：

报道了神经红蛋白(NGB)的基因表达、分离纯化和谱学表征.将载有NGB基因的pET3a质粒转入E.Coli BL21(DE3)plys细菌,于TB培养基中进行表达,其表达量占菌体总蛋白的10%左右.依次经硫酸铵分级沉淀,DEAE-Sepharose阴离子交换柱,Hiload16/60 Superdex 75凝胶过滤柱和Hiprep16/10 QFF阴离子交换柱纯化,得到了电泳纯的血红色可溶性蛋白.电喷雾质谱测得其分子量为16930.0 Da.紫外-可见吸收光谱表明,还原态的NGB在425 nm有一强吸收峰,在531和559 nm处有弱吸收峰,它们可分别归属为金属卟啉的γ,β和α吸收带,氧化态的NGB在413 nm处有强吸收,则对应于金属卟啉的γ吸收带,是电子在卟啉环中非定域化π电子的轨道跃迁(π→π*)的结果.荧光激发谱最大波长为281nm,发射谱最大波长为338 nm.圆二色谱表明其二级结构为典型的α螺旋结构,在410 nm处有一血红素正峰.酸稳定性研究表明,pH＞4时蛋白稳定.

关键词：神经红蛋白、基因表达、分离纯化、谱学表征

所属期刊栏目：50

分类号：Q5(生物化学)

资助基金：国家自然科学基金20471025;聊城大学校科研和教改项目

在线出版日期：2005-07-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：964-969