c-Jun氨基末端激酶3结构域突变质粒的构建、鉴定与转染

摘要：

为构建c-Jun氨基末端激酶3(c-Jun N-terminal kinase3,JNK3)的pVP16-eGFP-Myc-JNK3活化环(activation-loop,A-loop)结构域突变型重组质粒,通过A-loop突变型JNK3的cDNA序列以及pVP16-eGFP-Myc的酶切位点设计引物,PCR扩增目的基因,使用限制性内切酶Mlu I与Xba I将基因克隆到pVP16-eGFP-Myc真核表达载体中,构建pVP16-eGFP-Myc-JNK3(A-loop)结构域突变型重组质粒.转化后,通过双酶切鉴定与DNA测序判断是否成功构建重组质粒,使用TransIntroTM EL Transfection Reagent转染人胚肾(human emborynic kidney,HEK)293T细胞,通过荧光显微镜下观察融合蛋白表达情况.结果表明:构建pVP16-eGFP-Myc-JNK3(A-loop)结构域突变型重组质粒,双酶切鉴定和测序结果显示构建成功;pVP16-eGFP-Myc-JNK3(A-loop)成功转染HEK293T细胞且表达.鼠源JNK3结构域突变型质粒构建成功,对进一步研究JNK3结构域在相关疾病的作用和机制提供实验工具.

关键词：c-Jun氨基末端激酶3、活化环、真核表达质粒、结构域、突变

所属期刊栏目：19

分类号：R319(医用一般科学)

资助基金：国家自然科学基金81671208

在线出版日期：2019-11-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：118-123