C群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白NhhA重组载体pASK-IBA37 plus-nhhA的构建

摘要：

构建C群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白NhhA重组载体pASK-IBA37plus-nhhA.以脑膜炎奈瑟菌C群菌株为实验材料,根据GeneBank上的已知序列设计引物,通过聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增C群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白NhhA基因(nhhA).将nhhA与pASK-IBA37 plus质粒用EcoRI,XhoI进行双酶切并尝试不同条件进行连接;连接产物实现在大肠杆菌TOP10感受态细胞中的转化.使用验证质粒图谱初筛和PCR与EcoRI,XhoI双酶切双重验证法复筛的方式筛选pASK-IBA37plus-nhhA阳性转化子.最后将构建好的pASK-IBA37plus-nhhA进行基因测序.成功构建C群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白NhhA重组载体pASK-IBA37plus-nhhA,同时发现nhhA与pASK-IBA37plus摩尔数之比为5.1、连接体系20 μL、DNA终浓度为1.7 ng/μL时,获得的转化子阳性率能达到18.8%,且转化子菌落总数数量适中,方便后续筛检.同时,测序得到1797 bp的nhhA序列信息,在GenBank上进行序列相似性比对,发现该基因与脑膜炎奈瑟菌NGH38的外膜蛋白GNA992(Neisseria men-ingitidis strain NGH38 outer membrane protein GNA992)基因的相似性为98%.

关键词：C群脑膜炎奈瑟菌、外膜蛋白NhhAnhhA、外源表达载体pASK-IBA37plus-nhhA

所属期刊栏目：18

分类号：Q812(生物工程学(生物技术))

资助基金：内蒙古自然基金2015MS0828;内蒙古医科大学"科技百万工程"资助重大项目YKD2014KJBW004;内蒙古自治区留学人员科技活动项目1410006;内蒙古医科大学中青年人才团队项目NYTD-2015009

在线出版日期：2018-05-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：31-36