慢病毒介导稳定表达HBcAg的P815/c细胞株的建立及鉴定

摘要：

研究旨在建立稳定表达HBcAg的P815/c细胞株,为评价针对HBcAg的乙肝疫苗的免疫效果提供体外感染的细胞模型.通过构建携带HBcAg基因的慢病毒表达载体质粒pLenti-Ubc-HBcAg-EGFP-3FLAG-IRES-Puro,载体质粒携带有加强型绿色荧光蛋白(eGFP)及嘌呤霉素(Puromycin)抗性标记基因,与包装质粒pLP1、pLP2以及包膜质粒pLP/VSVG共转染人胚肾293T细胞进行包装,得到携带有HBcAg基因的重组慢病毒颗粒LV-HBcAg-Puro.经纯化、鉴定后转染小鼠肥大瘤细胞株P815细胞72 h后,通过加入并维持2 μg/mL的嘌呤霉素杀死未被有效感染的细胞,药物筛选约10 d后,免疫荧光及流式细胞仪检测表达GFP的细胞比例在98%以上,Western Blot可检测到转染后细胞内HBcAg的蛋白表达.成功构建稳定表达HBcAg基因的细胞株P815/c,为研究小鼠体内针对HBcAg的疫苗诱发的CTL反应提供了细胞杀伤实验的靶细胞.

关键词：慢病毒、乙型肝炎核心抗原、P815细胞株

所属期刊栏目：17

分类号：R512.62(传染病)

资助基金：国家自然科学基金面上项目81270502

在线出版日期：2017-04-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：147-151