脂多糖诱导肿瘤坏死因子释放因子基因过表达慢病毒载体的构建及鉴定

摘要：

探讨构建人脂多糖诱导肿瘤坏死因子释放因子(LITAF)基因的过表达慢病毒载体的技术方法,并检测其体外表达目的基因的水平.设计LITAF基因引物,应用聚合酶链反应(PCR)的方法扩增LITAF基因片段;应用EcoRI、BamHI酶切LV8载体,通过连接酶将LITAF基因片段连接至线性化的LV8载体上,应用酶切及测序方法鉴定LITAF-LV8重组质粒,将其包装慢病毒后感染293T细胞(人胚肾细胞),观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,验证后感染肝癌细胞株HepG2.RT-PCR和Western-blot鉴定感染后HepG2中LITAF的表达.LITAF基因在慢病毒感染的HepG2细胞中的表达显著高于对照组细胞.说明成功构建了过表达LITAF的HepG2细胞株,为后期研究提供了实验基础.

关键词：LITAF、慢病毒、载体构建、过表达、肝细胞肝癌

所属期刊栏目：16

分类号：R34(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：国家自然科学基金项目81101819

在线出版日期：2016-05-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：104-106