人Kai-1基因真核表达载体的构建及其体外表达

摘要：

克隆人Kai-1基因,构建其真核表达载体,并在体外细胞系中进行表达验证.提取人正常肝细胞系HL7702的总RNA,通过RT-PCR其反转录为cDNA;以该cDNA为模板,通过PCR扩增出Kai-1基因的编码区,将该目的片段纯化后亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1 myc-his(-)中,利用菌落PCR及DNA测序分别对Kai-1基因编码区的大小及序列进行鉴定.将所构建的重组质粒通过脂质体瞬时转染Hela细胞,48 h后裂解细胞,利用Western blot检测有无目的蛋白的表达.测序证实所克隆的Kai-1编码区cDNA正确地插入pcDNA3.1 myc-his(-)中,经Westemblot检测证实其在Hela细胞中得到表达.成功克隆了人Kai-1 cDNA,构建了其真核表达载体,并在Hela细胞中得到有效表达,为进一步研究Kai-1的功能奠定了基础.

关键词：Kai-1、真核表达、克隆、cDNA

所属期刊栏目：14

分类号：R318.04(医用一般科学)

在线出版日期：2014-12-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：16-19