MiR-218慢病毒表达载体的构建及鉴定

摘要：

构建人mir-218-2,pre-miRNA慢病毒表达载体,为研究miR-218在人体的功能及作用机制打下基础.以人hsa-mir-218-2前体序列,设计部分互补的正反向引物,进行引物退火,形成引物二聚体.PCR扩增引物二聚体,酶切后插入到线性化pGCSIL-GFP慢病毒表达载体中,对重组质粒进行双酶切鉴定,并进行慢病毒的包装与滴度检测.用构建好的慢病毒表达载体感染人胃癌细胞MKN-28,qPCR检测细胞内miR-218表达.结果显示,重组质粒经双酶切分析及转化菌液测序,插入序列正确,慢病毒表达载体感染人胃癌细胞后qPCR检测显示能显著增高miR-218的表达.说明本实验成功构建了hsa-mir-218-2慢病毒表达载体,感染人胃癌细胞后能有效提高miR-218的表达.为进一步研究miR-218在人体的功能及作用机制建立了实验基础.

关键词：microRNA、miR-218、慢病毒表达载体

所属期刊栏目：11

分类号：R372(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金81071763

在线出版日期：2011-09-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：2888-2892