截短型HCV NS5B RNA聚合酶在大肠杆菌中表达纯化及鉴定

摘要：

为构建HCV截短型ns5b△21基因的原核表达质粒;在大肠杆菌中表达NS5B蛋白并纯化,制备其抗体.运用软件设计引物,以BB7复制子为模板PCR扩增ns5b△21基因;克隆入原核表达载体pRSETA.将重组表达质粒pRSETA-ns5b△21转化B121大肠杆菌,并诱导表达、可溶性分析及纯化;用纯化的NS5B蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体.结果酶切鉴定和序列测定表明成功的构建了重组表达质粒pRSETA-ns5b△21;其经IPTG诱导后行SDS-PAGE可见新生表达条带,Western-blot证实了其特异性和抗原性良好;利用镍离子亲和层析和电洗脱方法获得了纯化NS5B蛋白;用纯化蛋白免疫小鼠制备出了多价抗血清.说明表达和纯化的截短型HCV NS5B RNA聚合酶可用于下一步筛选单链抗体.

关键词：HCV、NS5B RNA聚合酶、大肠杆菌、蛋白表达

所属期刊栏目：10

分类号：Q343.17(遗传学分支学科)

资助基金：国家自然科学基金项目30600564、30670100、30700710、3070030

在线出版日期：2010-05-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：863-867