羊布鲁菌外膜蛋白Omp22的原核表达及鉴定

摘要：

布鲁菌外膜蛋白 Omp22与布鲁菌致病性相关,又可诱导机体免疫反应.为进一步研究Omp22的特性,对其进行原核表达,并初步鉴定.根据Genbank序列,设计并合成羊布鲁菌外膜蛋白 Omp22引物.以羊布鲁菌M5株基因组DAN为模板,PCR扩增并克隆入原核表达载体 pGEX-4T-1中.酶切鉴定正确后,测定序列;将重组质粒 pGEX-4T-1-Omp22电转化大肠杆菌DH5α中,诱导表达,并采用羊布鲁菌兔免疫血清,Western-blot初步检测融合蛋白GST-Omp22表达情况和免疫学特性.结果PCR扩增出约660 bp目的条带,与预期相符;酶切鉴定和测序结果表明,成功构建了 pGEX-4T-1-Omp22 原核表达载体;优化诱导温度,结果表明,在25℃诱导表达时,该融合蛋白大部分出现在上清中;Western-blot结果证实,GST-Omp22可与羊布鲁菌兔免疫血清特异性结合.说明成功构建了 Omp22 蛋白原核表达载体并进行了可溶性表达;该融合蛋白可与羊布鲁菌兔免疫血清特异性结合.Omp22蛋白的表达,为进一步研究布鲁菌的致病机制以及疫苗研制奠定基础.

关键词：羊布鲁菌、外膜蛋白Omp22、原核表达、鉴定

所属期刊栏目：9

分类号：Q516(蛋白质)

资助基金：军队科技攻关项目06G091;第四军医大学科研重点项目05XJZ006

在线出版日期：2009-07-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：3969-3973