胰岛自身抗原GAD65片段和胰岛素B链基因共表达DNA疫苗的构建与表达

摘要：

构建两种胰岛自身抗原谷氨酸脱羧酶(glutamic acid decarboxylase,GAD)65片段与胰岛素B链基因共表达DNA疫苗,并检测其在体外COS-7细胞中的表达.PCR方法从GAD65质粒中扩增出GAD190-315和GAD490-570两个片段的cDNA,overlap法再分别与信号肽基因进行拼接,将拼接后的融合基因SGAD190-315和SGAD490-570分别与胰岛素B链基因依次克隆入双启动子真核表达载体pBudCE4.1中.重组质粒经酶切和测序鉴定后,脂质体体外转染COS-7细胞,Western blot方法检测目的基因在该细胞中的表达.结果表明核酸序列测定克隆的融合基因和胰岛素B链基因序列与报告序列一致,开放阅读框正确,Western blot显示转染了DNA疫苗的COS-7细胞中均可检测两个目的基因的表达.两种GAD65片段与胰岛素B链基因共表达DNA疫苗均成功构建,为自身免疫糖尿病的免疫干预研究奠定了实验基础.

关键词：GAD65、胰岛素B链、DNA疫苗、自身免疫糖尿病

所属期刊栏目：7

分类号：R587(内分泌腺疾病及代谢病)

资助基金：国家自然科学基金30177440;30670991

在线出版日期：2007-09-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：3665-3669