原核生物pPLacZ报道分子系统的构建及鉴定

摘要：

构建可以鉴定原核基因启动子和检测基因转录活性的报道分子系统pPLacZ.用PCR方法从野生型大肠杆菌基因组DNA中扩增lacZ基因的全基因序列(3 258 bp)和结构基因序列(3 089 bp)克隆入经改建的含有pUC19的多克隆位点的pBR322载体中,经酶切和测序鉴定正确的两个质粒分别命名为pPLacZ-Control和pPLacZ-Basic.用PCR从野生型大肠杆菌基因组DNA中增热休克基因htpX的启动子序列并克隆入pPLacZ-Basic中,经酶切测序鉴定正确的报道载体pPLacZ-htpX转入细菌中,检测高温应激时β-半乳糖苷酶活性水平.成功构建了原核生物报道分子系统pPLacZ以及检测基因htpX的报道质粒pPLacZ-htpX.应用此系统通过检测LacZ的比活性成功测定了大肠杆菌htpX基因高温应激时其转录活性的动态变化.原核生物质粒报道分子系统pPLacZ操作简便,可替代国际通用的原核噬菌体报道分子系统对原核基因的启动子进行鉴定和转录活性检测.

关键词：原核基因、报道分子系统、lacZ

所属期刊栏目：6

分类号：R392.33

在线出版日期：2006-11-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：3268-3271,3275