rhBMP-2m大规模制备纯化过程中使用尿素的分析

摘要：

为大规模制备rhBMP-2m,将高表达rhBMP-2m的工程菌株进行高密度发酵、温度诱导表达,收集菌体,经裂菌和超声洗涤得到并纯化的包涵体.洗涤后的包涵体中,rhBMP-2m占蛋白量的75.1%.为获得高纯度的rhBMP-2m,采用尿素作变性剂将包涵体溶解,经SP-Sepharose FF柱和Q-Sepharose FF柱两步纯化.rhBMP-2m包涵体经pH6.5尿素溶解后,经SP-Sepharose FF柱纯化,蛋白纯度为91%;若rhBMP-2m在碱性尿素中作用时间超过48 h,再经Q-Sepharose FF柱纯化后,纯化产物中在还原性SDS-PAGE中会出现少量与rhBMP-2m二聚体大小接近的蛋白带,显示出碱性尿素对rhBMP-2m的共价修饰作用,会严重地影响rhBMP-2m的纯化效果和活性;若24 h内完成分离纯化则影响较小,纯化后rhBMP-2m单体的纯度达98%以上.本研究表明尿素适合rhBMP-2m包涵体的大规模纯化.文章对使用尿素的利弊进行了讨论,提出大规模制备蛋白质时最好避免在碱性环境使用高浓度尿素.

关键词：人骨形成蛋白2成熟肽、高密度发酵、大规模蛋白质纯化、尿素

所属期刊栏目：6

分类号：R3(基础医学)

在线出版日期：2006-05-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：746-750