用慢病毒转染技术实现Gnaq基因在SH-SY5Y细胞中持续稳定高表达

摘要：

目的 探讨用慢病毒转染技术实现Gnaq基因在人神经母细胞瘤株SH-SY5Y中持续稳定高表达的可行性,为深入研究Gnaq在脑衰老及相关疾病中的作用及分子机制奠定基础.方法 通过NCBI网站查询Gnaq的编码序列并设计相应的克隆引物,以高表达Gnaq的HepG2细胞的cDNA为模板,PCR扩增得到带适宜酶切位点的目的基因,将目的基因连接入慢病毒载体PLIG,转染感受态细胞,筛选阳性克隆,测序鉴定后包装慢病毒,转染SH-SY5Y细胞；于转染后24 h、第5代时检测GFP荧光表达率；检测第3代、第5代PLIG-Gnaq-SH-SY5Y细胞内Gnaq的转录水平.结果 荧光检测显示SH-SY5Y细胞的转染效率接近100％,此表达效率可持续至转染后第5代；RT-PCR检测显示转染后第3代、第5代的PLIG-Gnaq-SH-SY5Y细胞内Gnaq呈明显的高转录水平,未明显受冻存的影响.结论 利用慢病毒转染技术实现Gnaq基因在SH-SY5Y细胞内长期稳定高表达具有可行性,可用PLIG-Gnaq-SH-SY5Y作为模型细胞深入研究Gnaq基因在神经细胞中扮演的角色及相关机制.

关键词：慢病毒载体、Gnaq基因、SH-SY5Y细胞、过表达

所属期刊栏目：34

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金资助项目81260195;云南省自然科学基金资助项目2010ZC110

在线出版日期：2013-10-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：4-7