人乳头状瘤病毒16型E6基因短发夹结构RNA慢病毒载体的构建及鉴定

摘要：

目的 以人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16型E6基因为靶点,构建小发夹状RNA(small hairpin RNA,shRNA)慢病毒载体.方法 将HPV 16E6基因的特异性序列,应用基因重组技术插入到包含U6启动子及绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的慢病毒载体pGCL-GFP中.重组质粒命名为pGCL-GFP-HPV16-E,测序鉴定后与慢病毒包装质粒pHelper 1.0及pHelper 2.0通过lipofectamine 2000共转染293T细胞,病毒液根据绿色荧光蛋白(GFP)表达水平测定滴度.结果 PCR扩增和测序结果证实HPV16 E6 shRNA核苷酸链序列插入正确,包装慢病毒产生病毒悬液,测定滴度为2×10<'9>TU/mL.结论 应用基因重组技术等方法,可成功构建HPV 16 E6 shRNA慢病毒载体.

关键词：人乳头瘤病毒、小发夹状RNA、E6、慢病毒

所属期刊栏目：32

分类号：R735.34(肿瘤学)

资助基金：广东省自然科学基金资助项目07005147

在线出版日期：2011-07-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：16-20