重组人survivin腺病毒的构建与鉴定

摘要：

目的构建人survivin基因shRNA重组腺病毒载体，为缺氧性肺动脉高压（Hypoxic pulmonary hypertension， HPH）的基因治疗研究提供实验基础。方法构建survivin-siRNA表达质粒，测序鉴定正确后，将survivin-siRNA表达质粒与含有腺病毒右臂的骨架质粒pBHGE3共转染至人293A细胞，包装成腺病毒Ad-survivin并扩增，TCID50法测定病毒滴度。将人肺动脉平滑肌细胞缺氧培养24 h，并将细胞分为空白对照组（Con组），阴性对照组（Ad-LacZ组），不同Ad-survivin序列的干扰组（sh1组、sh2组、sh3组）。Ad-survivin感染缺氧人肺动脉平滑肌细胞，Western blot检测survivin蛋白，验证重组腺病毒干扰效果。结果①将shRNA片段与pAd-U6-CMV连接后的质粒进行测序，结果提示目的基因片段插入成功；②TCID50法测定病毒Ad-survivin-shRNA1、Ad-survivin-shRNA2和Ad-survivin-shRNA3的滴度分别是1×1010，1.2×1010，1×1010；③sh2组缺氧人肺动脉平滑肌细胞内survivin蛋白表达明显低于其他4组(P＜0.05)。结论本研究成功构建人survivin腺病毒载体，为研究survivin基因在缺氧性肺动脉高压中的作用提供了实验基础。

关键词：survivin、腺病毒、RNA干扰、肺动脉平滑肌细胞、缺氧

所属期刊栏目：32

分类号：R511.8(传染病)

资助基金：国家自然科学基金81170045

在线出版日期：2017-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：361-364