一株嗜热梭菌β-葡聚糖酶基因的克隆和表达

摘要：

提取嗜热梭菌(Clostridium.sp)基因组DNA,首次通过PCR克隆了该菌的β-葡聚糖酶基因全长,结果表明:该基因全长1040 bp,ORF为1003 bp,编码334个氨基酸,计算分子量为37.8 kD,等电点为7.67.经Blast分析,该序列与热纤梭菌同源性最高(99%),而与基因库中嗜热梭菌的同源性为94%,该基因已被GenBank接受(AY225318).用BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切目的片段和表达载体pET-30a(+)后相连接,构建重组表达载体pET-clo,并导入BL21细菌中表达.酶学特性表明:SDS-PAGE电泳在37 kD左右有表达蛋白带,该工程菌最适酶活29.4 U/mL,是出发菌的15倍,最适温度在80℃左右,最适pH在9左右.该工程菌可构建耐热性好、酶活高的杂合基因工程菌.

关键词：动物营养与饲料科学、β-葡聚糖酶、嗜热梭菌、克隆、大肠杆菌、表达

所属期刊栏目：21

分类号：Q785(基因工程（遗传工程）)

资助基金：高等院校骨干教师基金;国家自然科学基金30000118

在线出版日期：2005-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：45-49