棉铃虫钙粘蛋白N端多肽多克隆抗体制备及对Bt抗性的初步检测

摘要：

用重组表达的棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)中肠钙粘蛋白N端多肽片段制备兔多克隆抗体,并利用其对Bt抗性进行鉴定.通过RT-PCR方法对棉铃虫中肠钙粘蛋白N端多肽的基因片段Cad285进行PCR扩增,将其克隆到pET-30a原核表达载体中,在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导表达,得到35 ku的重组融和蛋白,融合表达的包涵体经过变性、Ni-NTA柱亲和纯化、复性等方法处理包涵体,获得可溶性纯化蛋白,用纯化后蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体,ELISA检测其效价高于1:16 000;利用最终获得的多克隆抗体对室内纯合Bt抗/感品系的棉铃虫中肠钙粘蛋白进行Western blot 分析,结果显示敏感和抗性品系之间有明显差异,表明其能够应用对Bt抗性进行初步检测.

关键词：棉铃虫、钙粘蛋白、原核表达、多克隆抗体、Bt抗性

所属期刊栏目：47

分类号：Q96(昆虫学)

资助基金：农业部高毒农药替代试验示范项目2005种植业植保函7号

在线出版日期：2010-07-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：293-298