基于纳米颗粒的赭曲霉毒素A高灵敏酶联免疫检测方法的建立及应用
赭曲霉毒素(ochratoxins)主要是由青霉菌Penicillium和曲霉菌Aspergillus产生的有毒次级代谢产物,常见于发霉或发酵的农产品中,其中赭曲霉毒素A (ochratoxin A,OTA)毒性最强且最为普遍.OTA是粮食作物和饲料的重要污染物,在加工、储存或运输过程中均可产生,具有肾毒性和免疫毒性,可通过蓄积作用发挥毒性效应,对人类和动物健康造成严重威胁.本研究通过将OTA单克隆抗体包被于纳米磁珠(magnetic nanoparticles,MNPs)表面,获得具有免疫活性的磁珠抗体复合物(MNPs-Anti OTA),并制备生物素标记的偶联抗原OTA-BSA-Bio,后续采用链酶亲和素标记的纳米金颗粒(Strep-HRP-AuNPs)催化底物进行信号检测,最终建立了OTA高灵敏检测方法(MNPs-bs-AuNPs-ELISA).在最优条件下,经计算该方法检测下限(IC10)为0.01ng/mL,检测区间(IC20-IC80)为0.02-0.73ng/mL,半数抑制率(IC50)为0.13ng/mL.与OTA类似物OTB、OTC交叉反应性为4.3％和8.1％,对其他常见真菌毒素AFB1、ZEN、FB1、DON、CIT和PAT均无交叉反应.玉米、面粉和大豆样本中的加标回收率可达85.6％-115.7％,对天然样本中OTA含量的检测结果表明,该方法与LC-MS/MS相关性良好.本研究建立的MNPs-bs-AuNPs-ELISA可满足谷物及饲料样本中OTA的快速、高灵敏度定量检测,成本较低,具有很好的应用前景.
赭曲霉毒素A、纳米磁珠、纳米金、生物素-亲和素系统、定量检测
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浙江省自然科学基金;浙江农林大学人才项目;浙江农林大学学生科研训练项目;浙江省重点研发计划
2020-06-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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