rDNA介导的酿酒酵母稳定表达载体的构建

摘要：

将一段含有质粒ColEI复制起始区(ori)和氨苄青霉素抗性基因(bla)的DNA片段插入到酿酒酵母rDNA片段中部的EcoR I或Hpa I位点之间,在pYES2载体的基础上构建了两个rDNA介导的酿酒酵母稳定表达载体pHBM367E或pHBM367H.将黑曲霉糖化酶基因导入载体pHBM367H,获得表达载体pHBMl66.为生物安全性的考虑,pHBMl66经npa I酶切去掉2.2kb的ColEI ori和bla片段后转化酿洒酵母Y33菌株,获得不含任何抗生素抗性基因的工程菌.随后,对糖化酶基因在酿洒酵母中的表达、稳定性进行了分析,结果显示,rDNA介导的糖化酶基因在酿酒酵母中的表达呈现不同的剂量效应,挑选高表达的菌株传80代之后仍能保持其产糖化酶的稳定性.

关键词：酿酒酵母、rDNA介导、糖化酶、生物安全性、剂量效应

所属期刊栏目：30

分类号：Q94(植物学)

资助基金：国家自然科学基金30600014;湖北省自然科学基金2008CDB058;湖北省教育厅重点项目D20101001;武汉市科技攻关计划201021037380-3

在线出版日期：2011-04-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：39-45