疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的高效表达

摘要：

疏棉状嗜热丝孢菌Thermomyces lanuginosus可产生具有重要工业生产价值的脂肪酶.根据已报道的相应序列设计特异引物,综合运用PCR、RT-PCR技术克隆到脂肪酶基因的全长DNA和cDNA序列.其中DNA序列长1071bp,包含876bp的开放阅读框以及3段内含子;cDNA序列长885bp.结构基因编码蛋白包含292个氨基酸,前17个氨基酸构成信号肽.序列提交GenBank,登录号分别为EU022703和EU370914.将脂肪酶基因cDNA序列的开放阅读框克隆到酵母分泌型表达载体pPIC9K中,转化毕赤酵母GS115得到重组子且实现了分泌表达.将重组子诱导产酶,在培养温度30℃、甲醇添加量1%的情况下,小规模发酵量达0.93mg/mL,其分泌表达的最高酶活为7.2U/mL.重组酶最适反应温度和pH分别是60℃和8.0.表达蛋白在60℃保温1h后仍有完全酶活,具有较高的热稳定性.

关键词：内含子、成熟蛋白、诱导、分泌表达、重组酶、最适反应温度、最适反应pH、热稳定

所属期刊栏目：28

分类号：Q94(植物学)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2006AA10Z304

在线出版日期：2009-05-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：268-274