黑曲霉pepD基因阻断突变菌株的构建及功能分析

摘要：

运用同源重组技术破坏了黑曲霉基因组中的pepD基因,该基因编码一种类subtilisin的胞外蛋白酶PEPD.实验以黑曲霉GICC2773基因组DNA为模板,PCR扩增pepD基因,并在此基因中间插入潮霉素抗性基因(hph)表达单元,由此产生了3.7kb的pepD阻断基因片段.将此阻断基因片段与载体pBS连接,构建成pepD基因阻断质粒pBSDH.采用原生质体一CaCl2/PEG法将酶切阻断质粒得到的含pepD基因和hph表达单元的3.7kb线性片段转化Aspergillus niger GICC2773菌株,在含潮霉素的平板上筛选潮霉素抗性转化子,从这些抗性转化子中经PCR检测分离到到1个pepD基因阻断突变菌株△pepD66.外源漆酶分泌活性分析显示,黑曲霉pepD基因的破坏使其外源漆酶的分泌表达有所提高.

关键词：同源重组、外源蛋白、分泌表达

所属期刊栏目：24

分类号：Q939.97(微生物学)

资助基金：Joint Project of GenencorInternationalInc.of USA

在线出版日期：2005-11-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：360-366