大鼠CRH基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定

摘要：

目的：构建针对大鼠促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）基因的RNA干扰（RNAi）慢病毒表达载体并进行鉴定。方法针对CRH基因设计4个RNAi靶点并分别构建入慢病毒骨架载体，测序鉴定。过表达质粒和RNAi质粒共转染293T工具细胞后，用Western blot进行外源筛靶以确定有效靶序列。有效RNAi病毒质粒与辅助质粒通过Lipofectamine 2000共转染293T细胞，培养48 h后，收集细胞培养上清液，将其浓缩后用孔稀释法测定病毒滴度。结果 Western blot外源筛靶显示3个靶点能有效敲减目的基因的表达。测定浓缩病毒悬液的滴度为1．5×109 T U／ml。结论成功构建了CRH基因的RNAi慢病毒载体，可用于CRH在应激反应中作用的研究。

关键词：促肾上腺皮质激素释放激素基因、RNA干扰、慢病毒载体

分类号：R338(人体生理学)

资助基金：国家自然科学基金81171041；江苏省自然科学基金BK2011197；江苏省高校自然科学研究项目12KJD320005；徐州医学院振兴计划

在线出版日期：2015-05-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：873-875