重组携带hIL-10基因的腺病毒载体的构建与鉴定

摘要：

目的 构建携带人白细胞介素10(hIL-10)基因的腺病毒载体,体外细胞学鉴定其介导的基因表达.方法 以pORF-hIL10质粒为模板,PCR扩增hIL-10基因,获得hIL10 cDNA片段,酶切并插入线性化pUC19质粒,命名为pUC19-hIL10.再酶切pUC19-hIL10,插入pDC315-EGFP,置换EGFP序列,构建pDC315-hIL10.将质粒pDC315-hIL10和pDC315-EGFP分别共转染至293细胞,产生复制缺陷型重组腺病毒.pDC315-hIL10和pDC315-EGFP分别感染大鼠肝细胞,免疫学方法鉴定目的基因的表达.结果 经PCR扩增、鉴定,证明已正确构建重组腺病毒Ad5-hIL10和Ad5-EGFP.pDC315-EGFP能够在大鼠肝细胞介导EGFP的表达,使细胞呈绿色荧光反应;pDC315-hIL10能够在大鼠肝细胞介导hIL-10的表达.结论 成功构建了重组腺病毒质粒Ad5-hIL10和Ad5-EGFP,可用于IL-10基因对肝细胞损伤的保护作用的进一步研究.

关键词：白细胞介素10、腺病毒载体、大鼠肝细胞

所属期刊栏目：38

分类号：R373(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：江苏省卫生职业技术教育研究课题J201017;南京军区医学科技创新立项课题10MA011

在线出版日期：2013-01-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：2793-2795,封3