大鼠雪旺细胞Neuritin基因shRNA表达载体构建及其体外抑制效应

摘要：

目的 构建针对大鼠neuritin基因的短发夹状小干扰RNA(shRNA)表达载体,并研究该载体对neuritin基因表达的沉默效应及雪旺细胞生存的影响.方法 设计并合成neuritin靶向siRNA序列,连接pGCSIL-GFP慢病毒表达载体后,将neuritin基因干扰质粒和重组表达质粒共转染人293T细胞,包装成慢病毒,以此感染大鼠雪旺细胞,分为空白对照组(A组)、无意义干扰组(B组)和干扰组(C组).RT-qPCR、Western blot及Annexin V/PI方法分别检测细胞neuritinmRNA、蛋白表达及细胞凋亡情况.结果 与A、B组相比,C组雪旺细胞neuritin mRNA和蛋白表达水平降低,而细胞凋亡明显增加(P＜0.01或P＜0.05).结论 成功构建neuritin基因shRNA慢病毒表达载体.其转染的雪旺细胞neuritin基因表达受抑制,并导致细胞凋亡增加.

关键词：Neuritin基因、shRNA载体、慢病毒转染、雪旺细胞、凋亡

所属期刊栏目：38

分类号：R346(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：国家自然科学基金81070655;江苏省科技厅基础研究计划自然科学基金BK2009441

在线出版日期：2012-08-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：745-748