人类疱疹病毒8型K1基因的克隆及其在内皮细胞和前列腺癌细胞中的表达

摘要：

目的 构建含人类疱疹病毒8型(HHV-8)致瘤基因K1的真核表达质粒,并将其导入内皮细胞(EC)和前列腺癌细胞(PC-3)中进行表达.方法 根据GenBank中登记的K1基因核酸序列设计PCR引物,在其5'端及3'端分别引入Xho Ⅰ和Xba Ⅰ酶切位点,并在其下游引入Flag标签蛋白序列用于后期K1蛋白表达的检测.以含有K1基因的HHV-8 DNA为模板扩增K1基因,经双酶切纯化后将其克隆入真核表达载体pCI-neo中.重组质粒经核酸测序鉴定后分别瞬时转染EC和PC-3细胞系,于转染后48h提取细胞RNA及蛋白,分别以RT-PCR和Westrn blot检测K1基因的转录和表达情况.结果 成功构建了含K1基因的重组质粒pCI-K1.核酸序列分析显示,克隆的K1基因全长928bp,与GenBank中登记的K1基因100%同源,引入的Flag序列完全正确.经pCI-K1转染后的EC及PC-3细胞中均可检测到K1mRNA转录和蛋白表达.结论 重组质粒pCI-K1构建成功,并在EC和PC-3细胞中正确表达.

关键词：人类疱疹病毒8型、K1致瘤基因、真核表达、前列腺癌

所属期刊栏目：37

分类号：R373(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：中国博士后基金20080441064

在线出版日期：2011-04-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

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