PIG-A基因逆转录病毒表达载体及包装细胞系的建立

摘要：

目的 构建含磷脂酰肌醇聚糖A类基因(PIG-A)的逆转录病毒载体并对其进行包装,获得稳定的产毒细胞系.方法 采用PCR方法从质粒pEBPIG-A中扩增PIG-A基因片断,Bam HⅠ及XhoⅠ双酶切后连接至逆转录病毒载体pLEGFP-C1,用限制性内切酶和DNA序列测定的方法对重组质粒进行鉴定.脂质体法转染PA317包装细胞,荧光显微镜下观察EGFP瞬时表达,G418筛选抗性克隆,收集病毒上清后感染NIH3T3细胞测定病毒滴度.结果 酶切证实PIG-A基因克隆至逆转录病毒载体,测序结果和原始序列相同.重组逆转录病毒载体转染PA317包装细胞,24～48h后荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白的表达.经G418筛选得到6个稳定抗性克隆,病毒滴度最高达1.6×105CFU/ml.结论 构建了含PIG-A基因的逆转录病毒载体,获得了稳定的产毒细胞系.

关键词：逆转录病毒载体、含磷脂酰肌醇聚糖A类基因、增强型绿色荧光蛋白

所属期刊栏目：33

分类号：R3(基础医学)

资助基金：江苏省高校自然科学基金03KJB320139

在线出版日期：2007-04-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：261-263