慢性乙型肝炎患者HBV cccDNA的检测

摘要：

目的建立和优化肝细胞内乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)的检测方法.方法蛋白酶K裂解法释放肝细胞核内HBV cccDNA及基因组DNA,细胞裂解液进行核酸纯化后用酚-氯仿法抽提,并采用酶消化和设计特异性引物两种方法排除其他病毒复制中间体对检测结果的干扰,最后进行聚合酶链式反应(PCR).结果以HBV松弛环状DNA(rcDNA)、阴性肝细胞、阴性血清作为对照,以包含HBV基因组全序列的质粒作为阳性对照,HBV感染者肝组织的PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳后出现的条带与目标片段分子量相等,且产物的DNA测序结果显示其序列与目标序列一致.外周血HBeAg(+)患者组肝组织检测结果的阳性率高于HBeAg(-)患者组.结论该方法检测肝细胞内cccDNA具有较高的特异性、敏感性,且成本较低.本方法临床标本初步检测结果显示病毒复制活跃患者肝组织中HBV cccDNA的阳性率较复制低的患者为高.

关键词：慢性乙型肝炎、共价闭合环状脱氧核糖核酸

所属期刊栏目：32

分类号：R5(内科学)

资助基金：国家自然科学基金272-BA0305;江苏省卫生厅资助项目135-07

在线出版日期：2006-07-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：525-527