癫痫大鼠边缘系统神经元凋亡研究

摘要：

@@颞叶癫痫是症状性癫痫中最常见者，与其解剖和病理密切相关的大脑边缘系统一直是癫痫研究者关注的重点。海人藻酸（KA）是谷氨酸结构类似物，脑内或系统给予，可选择性激活边缘系统诱发癫痫（EP）发作，由于其致痫后癫痫发作行为和病理学改变与人类颞叶癫痫的相似性，被广泛接受作为人类颞叶癫痫的急性模型。证据表明，持续癫痫后的神经元损伤存在细胞凋亡的过程，但多数报道局限于海马区。实际上痫性抽搐所致脑组织损伤累及皮层及边缘系统的大部分脑区。本研究用TUNEL标记技术观察实验性癫痫鼠边缘系统敏感脑区细胞凋亡的分布和时程变化。
材料与方法
雄性Wistar成年大鼠28只，分KA致痫组20只，对照组8只。
一、动物模型制备：大鼠乙醚麻醉置于立体定位仪，致痫组于双侧脑室分别注入0.5μl（含0.3μg）KA以制造癫痫模型。KA注射后10min癫痫发作，持续3h停止。分别于术后6h、1d、3d、7d各处死5只，快速取脑，－20℃储存备用。对照组双侧脑室注入等量生理盐水（NS），于上述相同时程各处死2只，取脑。
二、TUNEL原位末端标记：脑行冠状冰冻切片，片厚14μm，取背侧海马、杏仁体、背侧丘脑、下丘脑、梨状皮层为观察部位。凋亡细胞原位末端标记试剂盒购于Roche公司。切片用4％多聚甲醛固定1h后，参照手册步骤进行凋亡细胞染色标记，DAB显色，HE复染后封片镜检。
三、结果分析和统计处理：每只大鼠取同一观察部位切片四张（间隔60μm），用40X显微镜计数每一时程观察脑区单位平方毫米mm２阳性细胞数，并平均之作为本时程组鼠切片中阳性细胞数。实验数据以均数±标准差（±s，n／mm２）表示，用SPSS统计软件包对实验数据进行One-Way Anova分析。
结果
一、行为学观察：侧脑室注射KA 10min后均出现癫痫发作，持续3h停止。根据Racine癫痫行为分级，KA注射组动物达到四级或五级，符合癫痫模型要求。
二、光镜结果：TUNEL阳性细胞表现为细胞核呈棕黄色，核固缩呈圆形或不规则形；高倍镜下可见染色质深染聚集成块或碎裂，核边聚等，符合凋亡细胞形态变化。在注射NS组中，未见凋亡细胞的形态学改变。KA致痫组凋亡细胞在边缘系统分布与时程变化见表1。

机标关键词：癫痫大鼠、大脑边缘系统、神经元、凋亡细胞、原位末端标记、阳性细胞、颞叶癫痫、癫痫发作、时程变化、侧脑室、注射、细胞凋亡、实验数据、切片、癫痫模型、细胞形态变化、细胞数、脑区、多聚甲醛固定、对照组

所属期刊栏目：27

分类号：R74(神经病学与精神病学)

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共2页

页码：378-379