鸭血管紧张素转换酶2(ACE2)双抗体夹心ELISA检测方法的建立与应用

摘要：

为建立鸭血管紧张素转换酶2(angiotensin converting enzyme 2,ACE2)双抗体夹心酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)定量检测方法,首先利用纯化的鸭ACE2重组蛋白,成功制备了兔抗鸭ACE2多克隆抗体,间接ELISA法确定抗体效价为1:800;然后利用制备的鼠抗鸭ACE2多克隆抗体作为捕获抗体,通过戊二醛二步法对兔抗鸭ACE2多克隆抗体进行HRP标记,并将HRP标记的兔抗鸭ACE2多克隆抗体作为检测抗体,纯化获得的鸭ACE2重组蛋白作为标准品,建立鸭ACE2双抗体夹心ELISA定量检测方法,并对抗体浓度、捕获抗体最适包被条件、孵育条件、封闭条件及显色条件等进行优化;通过Western blot法检测正常白鸭与患传染性浆膜炎的病鸭不同组织间ACE2表达的变化;利用RT-qPCR方法检测正常鸭与患传染性浆膜炎的病鸭不同组织中ACE2基因的相对表达量.结果表明:所建立的双抗体夹心ELISA方法最低检测浓度为5 ng·mL-1,最佳线性范围为25～1 600 ng·mL-1,批内变异系数为1.65％～5.62％,批间变异系数为3.66％～6.81％,可检测出麻鸭各组织中ACE2含量.传染性浆膜炎组白鸭以及健康鸭心脏、肝脏等组织样品ACE2含量或表达存在差异,心脏组织中显著升高或上调;鸭传染性浆膜炎组心脏中ACE2 mRNA水平显著上调,肝脏组织中ACE2 mRNA水平升高不明显.采用该ELISA方法对不同畜(大鼠、猪、羊)、禽(鸭、鸡、鹅)的不同组织中ACE2进行了定量测定,证实该方法在不同畜禽上存在较大种属差异,仅适用于家禽ACE2的定量检测.综上,该研究成功建立了鸭ACE2检测的双抗体夹心ELISA方法,可用于禽类样品中ACE2的快速定量检测.

关键词：鸭、血管紧张素转换酶2(ACE2)、抗体制备、双抗体夹心酶联免疫吸附试验、定量检测

所属期刊栏目：44

分类号：S834(家禽)

资助基金：国家自然科学基金31972640

在线出版日期：2023-04-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：75-85