利用CRISPR/Cas9技术构建永生化脐带间充质干细胞系及MYC-AS1转基因研究

摘要：

人脐带间充质干细胞(hMSCs)是一种具有多向分化潜能的多能干细胞,在组织修复和某些疾病治疗的临床应用上发挥着重要作用.利用CRISPR/Cas9技术在腺相关病毒AAVS1位点插入具有磷酸甘油酸激酶PGK启动子和SV40-polyA的SV40 LT基因,使hMSCs达到永生化.并利用慢病毒构建具有抑癌作用的反义长链非编码RNA MYC-AS1转基因的hMSCs,从该细胞系的培养液中分离提取表达MYC-AS1的外泌体.通过处理肝癌HepG2细胞,研究外泌体对HepG2表型的影响.结果表明:与野生型MSCs相比,永生化细胞MSCs-SV40增殖显著加快,但其定向分化特性并未改变,可在体外稳定传代超过40代,且未发现成瘤性.MYC-AS1转基因hMSCs的外泌体能表达MYC-AS1,且显著抑制HepG2肿瘤细胞的增殖和迁移.这一研究通过CRISPR/Cas9技术敲入SV40LT基因成功构建了 hMSCs,其MYC-AS1转基因细胞的外泌体对HepG2肿瘤细胞具有明显的抑制作用,这对hMSCs及其外泌体的基础研究和临床应用研究具有重要意义.

关键词：脐带间充质干细胞、CRISPR/Cas9技术、永生化、外泌体、MYC-AS1

所属期刊栏目：42

分类号：Q343;R329.2+6(遗传学分支学科)

资助基金：国家自然科学基金面上项目81773013

在线出版日期：2021-08-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1-9