原核真核双表达加强型绿色荧光蛋白质粒的构建

摘要：

将原核启动子Ptrc和加强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因从EGFP原核表达质粒pYA3334-EGFP上切下,然后将其插入至真核表达质粒pVAX1真核启动子Pcmv的下游,构建成具有真核和原核启动子的双表达杂合质粒pVAXD-EGFP, 其长度为3823 bp.将pVAXD-EGFP分别转化鼠伤寒沙门氏菌X4550和转染COS-7细胞,应用流式细胞术、可见光谱扫描、SDS-PAGE测定EGFP原核表达;应用荧光显微镜观察EGFP在COS-7细胞内的表达.重组鼠伤寒沙门氏菌X4550 (pVAXD-EGFP)表达EGFP的量与仅以原核方式表达EGFP的X4550 (pYA3334-EGFP)相当;将质粒pVAXD-EGFP转染COS-7细胞, EGFP可在COS-7细胞核和胞浆表达,在荧光显微镜下发出强烈荧光.结果表明: 不仅成功地构建原核、真核表达集中于同一质粒的新型质粒pVAXD-EGFP, 而且原核、真核目的蛋白表达量达到很高水平,显示其在新型重组细菌疫苗方面有着诱人的应用前景.

关键词：加强型绿色荧光蛋白、双表达质粒、鼠伤寒沙门氏菌

所属期刊栏目：24

分类号：Q786;S852.61+2;R378(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划863-2002AA245051;国家自然科学基金30170700;高等学校优秀青年教师教学科研奖励计划175

在线出版日期：2004-01-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1-4,9