绵羊ovPAG7间接竞争酶联适配体检测方法的建立与应用

摘要：

为建立一种简便、经济、无创的应用于绵羊早期妊娠诊断的快速检测技术,以绵羊妊娠相关糖蛋白7(O-vine pregnancy-associated glycoproteins-7,ovPAG7)核酸适配体为分子识别探针,建立一种间接竞争酶联适配体(Indi-rect competitive enzyme-linked aptamer assay,ic-ELAA)检测ovPAG7的新方法,并对ovPAG7包被质量浓度、包被缓冲液、封闭条件、适配体浓度、链霉亲和素-辣根过氧化物酶(SA-HRP)稀释比例等检测条件进行优化,将建立的方法应用于人工授精后28 d的中国美利奴羊血清检测,检测结果与妊娠相关糖蛋白-酶联免疫吸附测定(PAG-ELISA)商业化试剂盒和B超检测法进行比较.结果显示,在ovPAG7包被质量浓度为2.0μg/ml、包被缓冲液为50 mmol/L碳酸盐缓冲液(pH 9.6)、1.0％牛血清蛋白质封闭2 h、适配体浓度为40 nmol/L、SA-HRP稀释比例为1:40000(体积比)、室温下竞争反应时间为40 min等优化条件下,ovPAG7在缓冲液体系和血清体系中质量浓度的线性范围均为0.1～50.0 ng/ml(R2>0.994),半数抑制质量浓度(IC50)分别为1.40 ng/ml和2.11 ng/ml,检测限分别为0.11 ng/ml和0.19 ng/ml.ovPAG7在空白样品中加标回收率为96.4％～106.8％,相对标准偏差小于6.0％.妊娠诊断结果显示,ic-ELAA法的诊断敏感性、特异性和准确率分别为96.0％、83.3％和91.2％,与B超检测结果一致性较高(Kappa值=0.810).

关键词：妊娠相关糖蛋白、适配体、早期妊娠诊断、绵羊

所属期刊栏目：38

分类号：S826.3+5(家畜)

资助基金：新疆生产建设兵团科技创新人才计划项目;重庆市自然科学基金面上项目;国家重点实验室基金

在线出版日期：2022-07-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：730-738