一种准确、简便测定CRISPR/Cas9基因编辑效率的方法

摘要：

CRISPR/Cas9基因编辑技术是近年来发展迅速的一项基因定点编辑技术,但对特定CRISPR/Cas9基因编辑技术的编辑效率进行有效评估的方法仍十分匮乏,本研究的目的是建立一种准确、简便测定CRISPR/Cas9基因编辑效率的方法.在我们的方法中,将与种子专一表达启动子(2S3)连接的mCherry荧光蛋白报告基因作为选择基因,并以编码脂肪酸脱氢酶FAD2的基因为靶序列;然后对经CRISPR/Cas9编辑的拟南芥种子进行脂肪酸组分分析,根据其组分变化计算该方法的编辑效率.结果显示,利用mCherry荧光蛋白报告基因的种子专一表达特性,可简便快速地筛选阳性的初级转化子和后代的无转基因突变子;而种子油脂分析法能快速、准确地鉴定CRISPR/Cas9编辑的突变体,可以精确地检测出核酸长度小至单个碱基对的突变,用该方法获得的CRISPR/Cas9基因编辑效率(54.5％～74.1％)远高于基于聚丙烯酰氨凝胶电泳法获得的编辑效率(3.7％～15.4％).说明,该方法检测CRISPR/Cas9基因编辑效率的高效性与可行性.

关键词：CRISPR/Cas9、基因编辑、突变体筛选、脂肪酸组分分析

所属期刊栏目：36

分类号：Q784(基因工程（遗传工程）)

资助基金：科技部转基因重大专项2016ZX08010003-003

在线出版日期：2020-06-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：299-305