猪瘟病毒糖基化E2蛋白在重组杆状病毒中的表达与鉴定

摘要：

为获得糖基化的重组猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白,通过PCR扩增出去除C端跨膜区的猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV) E2蛋白基因,前面包含糖基化信号肽,末端引入StrepⅡ标签序列,将其克隆到Bac-to-Bac杆状病毒表达系统pFastBacTM HT B载体中,筛选获得阳性重组质粒pF-ge2,转化至含有杆状病毒穿梭载体的DH10Bac感受态大肠杆菌中,经蓝白菌落筛选和PCR鉴定,获得重组表达载体rBac-ge2.在脂质体介导下转染对数生长期的Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rAc-gE2.Western-blot试验结果表明,重组蛋白得到正确表达,具有良好的抗原性；用糖苷酶PNGaseF处理后重组蛋白分子量减小到40 000,证明重组蛋白为糖基化蛋白.这为进一步研究E2蛋白的功能及CSFV新型亚单位疫苗的开发奠定了基础.

关键词：猪瘟病毒、E2蛋白、糖基化、杆状病毒表达系统

所属期刊栏目：29

分类号：S858.28(动物医学（兽医学）)

资助基金：江苏省农业科技自主创新基金项目DCX104129

在线出版日期：2013-05-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：341-345