新型冠状病毒辅助蛋白ORF3a、ORF3b的致病机制研究

摘要：

目的 探讨新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的非结构蛋白ORF3a、ORF3b在宿主细胞中的功能.方法 采用细胞免疫荧光法检测SARS-CoV-2假病毒颗粒的组装和释放量,采用实时荧光定量聚合酶链式反应和蛋白质印迹法(Western blot)检测ORF3a、ORF3b对β干扰素(IFN-β)和炎症因子表达的影响,采用Western blot检测ORF3a、ORF3b对干扰素信号通路中蛋白表达的影响.结果 荧光显微镜观察结果显示,经SARS-CoV-2假病毒感染的过表达血管紧张素转化酶2(ACE2)的A549细胞(A549-ACE2)中,转染ORF3a表达载体、ORF3b表达载体的A549-ACE2细胞组装和释放出的SARS-CoV-2假病毒颗粒量均高于未转染和空载转染的A549-ACE2细胞,差异有统计学意义(P＜0.001),说明ORF3a和ORF3b可促进SARS-CoV-2假病毒颗粒的组装和释放;给予ploy(I ∶ C)刺激并转染ORF3a或ORF3b表达载体的A549细胞,其IFN-β相对表达量低于单纯给予ploy(I ∶ C)刺激的A549细胞,差异有统计学意义(P＜0.001),说明ORF3a、ORF3b转染表达可显著抑制ploy(I ∶ C)诱导的IFN-β表达水平;Western blot检测结果显示,与单纯给予IFN-β处理相比,给予IFN-β联合ORF3a或ORF3b转染处理能够抑制干扰素信号通路中关键蛋白MyD88、TRAF6的表达水平;转染ORF3a、ORF3b表达载体的A549细胞中炎症因子(肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1β、白细胞介素-6)相对表达量均高于空载转染的A549细胞,差异有统计学意义(P＜0.01或P＜0.001).结论 非结构蛋白ORF3能够促进SARS-CoV-2组装和释放,诱导宿主炎症应答,并抑制宿主干扰素表达.

关键词：新型冠状病毒、非结构蛋白、ORF3a、ORF3b、干扰素、炎症因子

所属期刊栏目：26

分类号：R373;Q932(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金31900679

在线出版日期：2022-07-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1-5