人Hiwi miRNA干扰质粒的构建及其鉴定

摘要：

目的 构建人Hiwi基因miRNA干扰质粒,探讨其对肝癌7721细胞株中Hiwi基因和蛋白表达的阻抑作用.方法 根据Homo sapiens Hiwi基因序列,设计RNA干扰靶点,构建4对Hiwi的pcDNATM6.2-GW/EmGFPmiR miRNA及1对无效对照miRNA干扰质粒并将其转染至肝癌7721细胞中,通过RT-PCR和Western blot检测7721细胞中Hiwi mRNA和蛋白的表达水平.结果 成功构建了4对Hiwi miRNA干扰质粒及无效干扰质粒,测序表明Hiwi干扰序列及读框完全正确.RT-PCR和Western blot结果显示,与未转染组及阴性对照组比较,转染该载体能有效下调7721细胞株中mRNA和蛋白的表达.结论 成功构建了Hiwi的干扰表达载体,为进一步探讨Hiwi基因在肝癌中的相关机制提供了实验基础.

关键词：Hiwi基因、miRNA干扰、真核表达质粒、肝癌

所属期刊栏目：17

分类号：R735.7(肿瘤学)

资助基金：国家自然基金项目NSFC81101800;江苏省南京市科技发展研究项目资助2010ZD220

在线出版日期：2013-05-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1-4,27