新孢子虫核酸检测方法的建立及应用评价

摘要：

以新孢子虫Nc-5 基因为目的基因,建立检测新孢子虫的PCR方法并初步应用.根据GenBank 发布的新孢子虫Nc-5特异性基因序列设计引物,以新孢子虫基因组DNA 为模板,利用梯度PCR法优化反应条件,建立PCR检测方法.以弓形虫、疟原虫、牛环形泰勒虫、包拉米虫和马尔太虫为模板进行扩增以验证建立方法的特异性.采用紫外分光光度计测定新孢子虫基因组DNA浓度和纯度,倍比稀释后的DNA进行PCR扩增,产物电泳分析确定建立方法的敏感性;选择高浓度和低浓度的新孢子虫基因组DNA重复检测3次,分析建立方法的重复性和稳定性.利用该方法对实验室建立的小鼠感染模型进行初步应用,评价建立方法的检测效果.结果成功建立新孢子虫的核酸扩增检测方法,扩增序列与GenBank(LN714476.1)中Nc-5 基因序列一致性为100%,建立的新孢子虫核酸扩增检测方法与弓形虫、疟原虫、牛环形泰勒虫、包拉米虫和马尔太虫均无交叉反应,最低能检测新孢子虫DNA浓度为0.5788 pg/μL,应用该方法检测感染新孢子虫的BALB/c小鼠模型,可在肺和脑组织中检测到新孢子虫的感染.结果表明,建立的新孢子虫核酸扩增检测方法有效,并为后续研究奠定基础.

关键词：新孢子虫、基因、小鼠、PCR、核酸检测

所属期刊栏目：24

分类号：S85;R44

资助基金：质检公益性行业科研专项201410061

在线出版日期：2017-08-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：79-84