蛋白激酶B2慢病毒载体的构建及其沉默效果的验证

摘要：

目的:利用RNA干扰技术,以蛋白激酶B 2(AKT2)的mRNA为靶点,设计、构建AKT-2的RNA干扰慢病毒载体,并对其沉默效果进行验证.方法:根据目的基因设计3个小干扰RNA(siRNA)靶点,进行引物合成.将单链的引物退火成双链oligo序列,连接入双酶切线性化的RNA干扰载体.测序验证正确的转化子,进行高纯度质粒抽提.提取3种阳性克隆质粒测序,转染HEK293-T细胞后产生慢病毒质粒.实验大鼠被随机分为5组,每组10只,空白对照组不注射慢病毒,NC-shRNA阴性感染组、PL-AKT2-shRNA-1感染组、PL-AKT2-shRNA-2感染组、PL-AKT2-shRNA-3感染组.大鼠附睾分别被注射200μL含有NC-shRNA、PL-AKT2-shRNA-1、PL-AKT2-shRNA-2、PL-AKT2-shRNA-3的病毒液;免疫印迹检测大鼠附睾AKT2的蛋白沉默效果.结果:测序结果证明3种慢病毒载体被包装成功.感染大鼠附睾后,AKT2的蛋白表达量均较阴性感染组和正常对照组明显降低,其中以PL-AKT2-shRNA-3质粒组干扰效果更为有效.结论:成功设计了AKT-2基因的RNA干扰靶点和制备了AKT-2基因的慢病毒载体,基因沉默效果明显.

关键词：蛋白激酶B2、慢病毒干扰、基因沉默、附睾

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资助基金：贵州省科学技术基金黔科合人才团队[2014]4005号

在线出版日期：2021-05-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：118-122