hiPSCs向多巴胺能神经前体细胞的定向分化对细胞增殖和迁移的影响

摘要：

目的 探讨人诱导性多能干细胞(hiPSCs)向多巴胺能神经前体细胞(DAPs)的定向分化对细胞增殖和迁移的影响,为优化诱导分化方案和细胞移植治疗提供新思路.方法 hiPSCs的诱导分化分为实验组(Exp)和对照组(Cont).实验组的诱导分化方案是在基础诱导培养基上添加3个信号通路的激活剂或抑制剂,对照组则仅使用基础诱导培养基.通过实时荧光定量PCR(qPCR)和免疫荧光检测诱导分化第0、7、14天的细胞多能性标志物NANOG、OCT4和SOX2,细胞增殖标志物KI67,神经干细胞(NSCs)标志物NESTIN,底板标志物FOXA2和DAPs标志物EN1、LMX1A、MSX1的表达;CCK8和划痕实验分别检测细胞增殖和迁移能力.结果 qPCR结果显示,在诱导分化过程中,对照组和实验组的多能性基因NANOG的表达均下降,且实验组下降趋势更明显(D7:P=0.0019,D14:P=0.0001).与对照组相比较,实验组第7天和第14天NESTIN、EN1、LMX1A和MSX1的mRNA水平表达均明显增加(NESTIN:P=0.0043;EN1:P=0.0002、LMX1A:P=0.0142、MSX1;P=0.0233).免疫荧光染色结果表明,两组未诱导的hiPSCs均大量表达NANOG、OCT4、SOX2和KI67;第7天,实验组细胞大量表达FOXA2/NESTIN双阳性,对照组细胞大多仅表达NESTIN阳性;第14天,实验组大量表达EN1、LMX1A、MSX1,而对照组表达较少;CCK8增殖实验结果显示,第7天和14天时,实验组的450nm吸光值均高于对照组(D7:P=0.0430;D14:P=0.0001);划痕实验结果显示,在第7天时,对照组与实验组的划痕愈合趋势的差异无统计学意义(P＞0.05),而第14天时,对照组相对于实验组的24h划痕愈合趋势明显增加(P=0.0023).结论 诱导分化方案添加的通路激活剂或抑制剂,可以促进hiPSCs向DAPs的分化,在总体水平能够促进细胞增殖,而抑制细胞分化后期的迁移能力.

关键词：人诱导性多能干细胞、多巴胺能神经前体细胞、诱导分化、增殖、迁移

所属期刊栏目：44

分类号：R735.9;R394.2;R457.7

资助基金：国家自然科学基金;广州医科大学十四五高峰学科建设项目;广东省医学科研基金

在线出版日期：2022-05-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：97-105,122