GST-β-catenin融合蛋白表达载体的构建及其在原核细胞中的表达

摘要：

目的 构建GST-β-catenin融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(E.col)中诱导表达.方法 从COS-7细胞中提取mRNA,反转录为cDNA.用PCR方法扩增出β-catenin基因全长,通过BamHI和SalⅠ酶切位点将其定向插入pGEX-4T-2载体中,构建原核表达质粒pGEX-4T-2-β-catenin,并转化E.coli DH5α,通过限制性内切酶酶切电泳和DNA测序鉴定正确后,转入E.coli BL21中,经异丙基硫代β-D半乳糖苷大量诱导表达,SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定.结果 酶切电泳及测序结果证明,成功构建了原核表达质粒GST-β-catenin,并用Western blot方法证实了GST-β-catenin融合蛋白的表达.结论 成功构建了GST-β-catenin原核表达载体,并证实了其在原核细胞大肠埃希菌中的表达,为进一步纯化β-catenin及研究其结构与功能提供了前提基础.

关键词：β-catenin、原核表达、融合蛋白

所属期刊栏目：37

分类号：Q78;R329.2;S814.8

资助基金：国家自然科学基金31201053

在线出版日期：2015-05-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：104-107