重组大鼠脑源性神经营养因子腺病毒的构建及体外表达分析

摘要：

目的 构建含有大鼠脑源性神经营养因子(BDNF)基因的重组腺病毒(AD)载体,并分析其体外表达情况.方法 将采用RT-PCR技术获取的大鼠BDNF的cDNA基因定向克隆入穿梭质粒pAdTrack-CMV中.通过与腺病毒骨架载体pAdeasy-1在细菌内同源重组形成重组腺病毒质粒pAd-BDNF,转染人胚肾293细胞后包装成有感染能力的重组腺病毒颗粒(Ad-BDNF).重组病毒感染体外培养的Hela细胞后,用RT-PCR、Western blot及免疫细胞化学检测细胞BDNF基因及蛋白表达情况.结果 pAd-BDNF测序结果和预期一致,同源重组并经293细胞包装后形成重组腺病毒Ad-BDNF,重组病毒感染Hela细胞后能高水平表达BDNF.结论 成功制备了重组腺病毒Ad-BDNF,感染细胞证实其呈分泌表达,为将其进一步应用于神经系统损伤性疾病治疗的研究打下了基础.

关键词：BDNF、腺病毒、基因治疗、脑损伤

所属期刊栏目：33

分类号：R39;R97

资助基金：广州市教育局科技计划项目08A040;广州市医药卫生科技项目201102A213119;广东省医学科研基金B2010066;广州市科技计划项目10C32060117;国家自然科学基金81000545;广东省自然科学基金9451008901002145;教育部高等学校博士学科点专项科研基金20090171120047

在线出版日期：2011-09-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：33-36