GM-CSF基因重组腺病毒穿梭载体的构建及Xba Ⅰ甲基化位点的应用

摘要：

目的 构建GM-CSF基因重组腺病毒穿梭载体并探讨Xba Ⅰ甲基化位点在构建中的应用,为构建GM-CSF基因重组腺病毒及更方便地利用Xba Ⅰ多克隆位点打下基础.方法 体外分离小鼠脾细胞,经ConA刺激,用含两种不同的Xba Ⅰ位点毗邻碱基的引物RT-PCR获取小鼠GM-CSF基因,经Xba Ⅰ及Xba Ⅰ双酶切后分别定向克隆入pAdTrack-CMV重组腺病毒穿梭载体中,比较两种重组载体酶切鉴定的效率并通过测序验证.结果 成功逆转录得到小鼠GM-CSF基因并克隆入pAdTrack-CMV中,测序结果与预期一致.酶切鉴定显示由于XbaⅠ位点毗邻碱基的不同导致甲基化的Xba Ⅰ位点在克隆菌株中不能被有效切开.结论 成功构建GM-CSF基因重组腺病毒穿梭载体,Xba Ⅰ位点对甲基化敏感.

关键词：粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、重组腺病毒、甲基化

所属期刊栏目：28

分类号：R3(基础医学)

在线出版日期：2006-10-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：176-179