梅花鹿骨钙素的原核表达与活性研究

摘要：

目的 利用基因工程技术表达纯化梅花鹿骨钙素重组蛋白(Bone gla protein,BGP)并初步研究其活性,为研究梅花鹿茸生长发育提供技术支撑.方法 通过PCR技术获取BGP基因,构建pGEX-BGP-His表达载体,并转化至Rosseta(DE3)宿主菌中,IPTG诱导表达.经Ni Sephrose 6 Fast Flow分离纯化,SDS-PAGE鉴定纯化产物.MTT法分析BGP对鹿茸软骨细胞chon-sv40的生物活性.结果 经双酶切、测序证实pGEX-BGP-His表达载体构建成功;成功诱导表达相对分子量33.5 KDa的重组蛋白;以37℃,0.1 mmol/L IPTG诱导5h条件下重组蛋白表达量较高;蛋白纯化后纯度可达95％;重组蛋白对鹿茸软骨细胞chon-sv40具有明显促增殖作用.结论 骨钙素与鹿茸软骨细胞chon-sv40的增殖密切相关,为后续BGP在骨代谢机制以及鹿茸有效成分的研究奠定基础,对鹿茸生长机制的研究具有重要意义.

关键词：梅花鹿、骨钙素、原核表达、鹿茸软骨细胞

所属期刊栏目：37

分类号：R282.74(中药学)

资助基金：吉林省科技发展项目20140622003JC;吉林省科技发展计划项目20130101142JC

在线出版日期：2017-03-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：62-66