基于CRISPR/Cas9技术构建人CLCN7基因编辑载体

摘要：

目的 为修复石骨症致病基因(CLCN7)进行前期探索,采用CRISPR/Cas9技术构建CLCN7基因编辑表达载体.方法 根据sgRNA设计原则,在CLCN7外显子区设计一对sgRNA,合成四条单链DNA寡核苷酸,退火后连接于CRISPR/Cas9质粒的BspQ I酶切位点处,然后转染感受态大肠杆菌DH5α,并通过氨苄青霉素抗性筛选阳性克隆,扩大培养.结果最后经过PCR和Sanger测序鉴定获得了两个基因编辑表达载体CLCN7-sg1RNA-CRISPR-Cas9和CLCN7-sg2RNA-CRISPR-Cas9.结论 基因编辑载体的成功构建为CLCN7突变修复提供了工作基础.

关键词：石骨症、CRISPR/Cas9技术、CLCN-7基因、基因编辑载体

所属期刊栏目：38

分类号：R393;R681

资助基金：坪山区卫生系统科研项目;深圳市卫生计生系统科研项目;深圳市科技计划项目;广西自然科学基金项目

在线出版日期：2020-07-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：470-472,475