体外定点突变PCR法构建abl T315I突变的重组质粒标准品

万腊根张长林江梅石淙简正伟闻芳

南昌大学第一附属医院;

摘要：

目的 利用聚合酶链反应(PCR)定点突变技术构建含人类abl基因第6号外显子片段的野生型及含T315I突变型重组质粒,作为检测abl T315I基因突变的阳性对照和阴性对照标准品.方法 先设计包括突变位点的两对引物,以健康人外周血基因组DNA为模板,扩增获得野生型和突变型abl基因第6号外显子片段,将其插入pSG5M-flag载体质粒中,并将所获重组质粒分别进行酶切与测序鉴定,通过紫外分光光度计检测标本的浓度和纯度.结果 DNA测序表明在预期位点上发生突变,abl基因第315位氨基酸密码子由苏氨酸(Thr)残基突变为异亮氨酸(Ile)残基,所构建abl基因野生型和突变型质粒,经酶切和测序鉴定与目的片段…展开v

关键词：定点突变、abl基因、T315I、阳性对照

所属期刊栏目：31

分类号：R733.72;Q343.1+3(肿瘤学)

资助基金：江西省自然科学基金201221AB205025

在线出版日期：2013-08-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：111-114