含PML/RARα(L型)与ABL双基因质粒标准品的制备及应用

摘要：

目的 建立一个含PML/RARα(L型)与ABL双基因质粒标准品,用于PML/RARαL型)的定量检测.方法 从NB4细胞中提取总RNA并逆转录为cDNA,以此为模板,设计PML/RARα(L型)与ABL基因特异性引物进行PCR,PCR产物经琼脂糖电泳、胶回收、PCMV4载体克隆后转化DH5α工程菌,提取质粒进行酶切、测序鉴定,提取质粒用于制作荧光定量PCR标准曲线,同时对质粒的稳定性能进行评价.结果 结果NB4细胞提取的总RNA完整性良好,构建的质粒经酶切鉴定后与目的条带一致,测序结果与目的片段几乎完全一致,且质粒的原始浓度为9×1012copies/ml,倍比稀释至9×104copies/ml,均能得到良好的标准曲线(R2≈1),且质粒的稳定性好,提示含PML/RARa(L型)与ABL双基因荧光定量PCR质粒标准品构建成功.结论 本研究建立了制备含PML/RARα(L型)与ABL双基因质粒标准品方法,并成功制备出稳定的含PML/RARα(L型)与ABL双基因质粒标准品.

关键词：内参基因、PML/RARα(L型)、实时定量PCR、质粒

所属期刊栏目：29

分类号：R344+.13;R733.7(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：江西省卫生厅科技计划课题20111022

在线出版日期：2012-02-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：482-485