重组人普兰林肽原核表达载体的构建及表达

摘要：

目的构建人普兰林肽基因原核表达载体,并诱导其在大肠杆菌中大量高效表达.方法将胰淀素25位的丙氨酸、28位的丝氨酸和29位的丝氨酸用脯氨酸代替,选用大肠杆菌偏爱的密码子对天然胰淀素碱基序列进行修饰,通过化学合成的方式合成了普兰林肽基因片段,经KpnI、HindIII双酶切后插入pET-39b(+)载体,构建pET-39b+[Pramlintide]重组质粒,转化BL21(λDE3)菌株,筛选重组子,并经IPTG诱导重组蛋白表达.结果构建的普兰林肽基因插入载体位置正确,且序列测定结果与预期一致;在37℃条件下,经0.1 mmol/L IPTG诱导后3 h,重组蛋白表达量最高,且重组蛋白主要存在于胞质蛋白中.结论成功构建重组人普兰林肽原核表达载体,并诱导其在大肠杆菌得以表达,为进一步工业化制备普兰林肽奠定了基础.

关键词：普兰林肽、密码子突变、原核表达、诱导表达

所属期刊栏目：45

分类号：Q81(生物工程学(生物技术))

资助基金：江汉大学研究生科研创新基金项目301004210001

在线出版日期：2017-04-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：77-82