串联表达载体中短重复序列（BmKb1）n模板的PCR效率及其优化条件研究

摘要：

采用Overlap PCR法获取BmKb1基因,构建载体pGEX-6p-1/BmKb1,同尾酶技术用于构建串联表达载体pGEX-6p-1/（BmKb1）n（n=2,4,6,8,10）。以pGEX-6p-1/（BmKb1）n为模板,使用标准PCR程序研究短重复序列PCR效率;以BmKb1八倍体为模板,分别研究PCR循环数、引物终浓度及退火温度对短重复序列PCR效率及特异性的影响。结果表明：串联重复序列数目增加,则非特异性条带增加,特异性条带含量减少;BmKb1基因串联体PCR扩增在18～20循环数、引物终浓度为0.05～0.1μM、60～62℃较高退火温度时,可获得相对高产量高特异性BmKb1基因串联体PCR片段。本研究将为串联表达载体克隆、筛选、测序及基因组STRs序列克隆测序提供技术参考。

关键词：重复序列、PCR、BmKb1、循环数

所属期刊栏目：40

分类号：Q785(基因工程（遗传工程）)

资助基金：武汉市科技局青年科技晨光计划项目200950199019-03;武汉市市属高等学校科学研究重点项目20070705;湖北省高等学校优秀中青年科技创新团队项目T2012

在线出版日期：2013-01-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：71-75