双氢青蒿素对前列腺癌PC-3细胞自噬的诱导作用及其机制

摘要：

目的 探讨双氢青蒿素(DHA)对前列腺癌PC-3细胞的自噬诱导作用及其机制.方法 用0、12.5、25、50、100 μmol/L DHA处理PC-3细胞,采用CCK-8法检测细胞活力,克隆形成实验检测细胞增殖能力.取PC-3细胞,设置对照组(不做处理)、DHA组(50 μmol/L DHA处理48 h)、自噬抑制剂3-MA组(5 mmol/L 3-MA处理48 h)、DHA+3-MA组(50 μmol/L DHA+5 mmol/L 3-MA处理48 h),采用Western blotting和RT-qPCR检测自噬相关蛋白[微管相关蛋白轻链3B(LC3B)、酵母Atg6同源物(Beclin-1)]的表达情况,透射电镜观察自噬小体形成情况,使用自噬双标慢病毒mCherry-GFP-LC3B转染PC-3细胞检测自噬流变化,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率.设置对照组(不做处理)、DHA组(50 μmol/L DHA处理48 h)、ROS抑制剂NAC组(5 mmol/L NAC处理48 h)、DHA+NAC组(50 μmol/L DHA+5 mmol/L NAC处理48 h),采用Western blotting检测ROS/AMPK/mTOR信号通路相关蛋白的表达.用50 μmol/L DHA处理PC-3细胞48 h后提取总蛋白,分成Input组(全蛋白裂解液)、IP组(加入Beclin-1抗体)、IgG组(加入同等质量的IgG),采用免疫共沉淀(Co-IP)实验检测Beclin-1与Vps34、Bcl-2及HMGB1蛋白的相互作用.结果 CCK-8法检测结果显示,PC-3细胞存活率随着DHA浓度的升高而降低,且呈剂量和时间依赖性(P<0.05);DHA作用24、48、72 h的半数抑制浓度(IC50)分别为97.12、57.10、29.35 μmol/L,据此选择50 μmol/L DHA作用48 h进行后续实验.克隆形成实验结果显示,PC-3细胞克隆形成率随着DHA浓度的升高而明显降低(P<0.01).Western blotting和RT-qPCR检测结果显示,与对照组比较,DHA组PC-3细胞中Beclin-1、LC3B mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与DHA组比较,DHA+3-MA组PC-3细胞中Beclin-1、LC3B mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01).透射电镜观察可见DHA组PC-3细胞中出现明显的自噬小体,且自噬小体数较对照组明显增多(P<0.05).mCherry-GFP-LC3B慢病毒转染实验结果显示,与对照组比较,DHA组每细胞红黄斑点比增高(P<0.01),DHA+3-MA组每细胞红黄斑点比降低(P<0.01).与DHA组比较,DHA+3-MA组细胞存活率降低,凋亡率增高(P<0.01).与对照组比较,DHA组PC-3细胞中p-mTOR蛋白相对表达水平降低(P<0.05),p-AMPK蛋白相对表达水平升高(P<0.01);与DHA组比较,DHA+NAC组p-mTOR蛋白相对表达水平升高(P<0.01),p-AMPK蛋白相对表达水平降低(P<0.01).Co-IP实验结果显示,DHA处理后Beclin-1与Bcl-2的作用减弱,与Vps34、HMGB1的结合增强.结论 DHA可诱导前列腺癌PC-3细胞发生自噬,其机制可能与调控自噬相关基因Beclin-1、LC3及ROS/AMPK/mTOR信号通路有关.

关键词：双氢青蒿素、前列腺癌、PC-3细胞、自噬

所属期刊栏目：48

分类号：R737.25(肿瘤学)

资助基金：重庆市科学技术研究项目41021300060448

在线出版日期：2023-07-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：676-685